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REF 20 100 / 20 160 07584E - CN - 2004/05

® 20 E

肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统

概要说明

API 20 E 是肠杆菌科和其它非苛养 G-杆菌的标准鉴定系

统 包括 21 个标准化微型生化测试和鉴定资料库 可鉴定

的菌谱名录 请参考说明书后的鉴定表

原理

API 20 E 试验条是由 20 个含干燥底物的小管所组成 这些

测定管用细菌悬浮液接种 培养一定时间後 通过代谢作

用产生颜色的变化 或是加入试剂後变色而观察其结果

根据说明表判读反应 参照分析图索引或使用鉴定软件得

到鉴定结果

试剂盒内容物

25  测试试剂盒 ( 货号. 20 100)

- 25 API 20 E 试条

- 25 培养盒

- 25 结果报告单

- 1 个封口夹

- 1 份产物说明书

100 测试试剂盒 ( 货号. 20 160)

- 100 API 20 E 试条 (4x25 试条)

- 100 培养盒

- 100 结果报告单

-  1 个封口夹

-  1 份产物说明书

试条的成分

API 20 E 试条的成分请参阅说明书后的结果判读表

必需但未提供的试剂和材料

试剂

- 0.85 % API NaCl 培养基 5 ml (Ref. 20 230) or

API 悬浮培养基 5 ml (Ref. 20 150)

- API 20 E 附加试剂盒 (Ref. 20 120) 或

单个的附加试剂  TDA (Ref. 70 402)

JAMES (Ref. 70 542)

VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)

NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn 试剂 (Ref. 70 380)

- 氧化酶 (Ref. 55 635*)

* 目录中没有销售的国家 请使用相近的试剂

- 矿物油 (Ref. 70 100)

- API 20 E 数值分析图谱(Ref. 20 190) 或

鉴定软件

材料

- 吸管或 PSI 管

- 安瓿开启器

- 安瓿架

- 微生物实验室一般设备

可能需要的附加试剂

- API OF 培养基 (Ref. 50 110) :

用于测定发酵型或氧化型代谢作用

- API M 培养基 (Ref. 50 120) :

用于测定兼性厌氧菌的运动性

警告和注意

•  仅供体外诊断和微生物质控使用

•  仅供专业人员使用

• 此试剂盒中含有动物源性成分 已知所使用原始材料和动

物的卫生状况不能*保证其不含传染性的物质 因此我

们建议所有样品应被视为具有传染性 并应按通常的安全

措施对其进行正确处理 勿吸入或咽下

• 所有标本 细菌培养物 接种物应被视为 具有传染性并

应进行正确处理 在整个试验过程中 要遵守无菌技术要

求和通常使用的防范措施 可参照 NCCLS M29-A 保

护试验室工作人员免受仪器生物公害和通过血液 体液

组织传染的疾病的侵害-当前版本 的内容 另外的防护

措施 可参照 微生物和生物医学实验室的生物研究安全

-CDC/NIH – 新版本 或参照各国正在使用的规章执

行

• 不要使用过期的试剂

• 使用前 请检查包装和成分是否完整

• 不要使用已经破损的试条 杯子破坏 干燥剂小袋已打开

等

• 有关产物性能的数据均由严格按照作步骤所进行的试验得

出 任何操作步骤的改变或偏离均会影响试验结果

• 试验结果的判断应由合格的微生物家所作 同时应将病

史 标本来源 菌落和显微形态考虑在内 如有可能 再

作一些附加试验 尤其是抗生素敏感谱

储存条件

试验条采用铝袋包装并附有干燥剂

一旦打开铝袋(*) 请使用封口夹(试剂盒已含有)重新封口

以保证试条的干燥 把铝袋撕开处末端放入打开的夹子并

小心的加紧两端 开启铝袋后 在 2-8 环境下 试验条可

享有 10 个月的有效期(或包装盒上的有效期 以较短时间

为准)

(*) 建议开封的方法 在封口下方剪开铝箔装 为防止意外

损坏干燥剂 开封时应保持铝箔袋垂直

标本  采集和前处理

API 20 E 不能直接用于临床或其他标本

需要进行鉴定的微生物必须首先根据标准微生物处理技术

于适合肠杆菌和/或非苛养革兰氏阴性杆菌的培养琼脂 例

如 麦康凯 上培养分离

IVD

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api ® 20 E  07584E –  CN - 2004/05

bioMérieux ® SA 中文 - 2

使用说明

氧化酶试验

必须按照制造商的使用说明进行氧化酶试验 由于它是

终图谱的主要数据 请将其记录于结果报告单上 第二十

一个试验

试条的准备

• 准备一个培养盒 盘和盖子 倒入约 5ml 蒸馏水或软化

水[或其它不含杂质或产生挥发性气体的化学物质 如

Cl2, CO2,等 ]于盘的蜂窝小凹中 造成一个湿室

• 在盘的沿边写上菌株号(不要写在盖上 以免错放)

• 从包装中取出试验条放到盘中

• 将试条置于孵育箱内

注意 API 20 E 只能用于肠道细菌和或非苛养的 G- 杆菌

苛养菌主要指对营养需求有特殊需要的菌(例 布鲁氏菌属

Brucella 和 法朗西丝菌属 Francisella) 这些菌没有包括在

API 20 E 数据库中 必须采用有效方法 排除这些菌的存

在

接种物的准备

• 根据"警告及注意"一栏所列方法打开一安瓿 API 0.85%

NaCl 培养基 (5ml)或一安瓿 API 悬浮培养基(5 ml) 或

使用 5ml 0.85 %无杂质 无菌盐水

• 用吸管或接种针从分离物的平板上挑取单个分纯菌落至悬

浮基物中 建议使用新鲜培养 18-24 小时

• 仔细研匀以达到均一的细菌悬液

制备好的菌悬液必须立即使用

注意 大多数弧菌 Vibrio 均嗜盐 如怀疑菌株为弧菌

请使用 0.85% NaCl (5ml) 培养基

试条的接种

• 用同一根吸管 将菌悬液充满 CIT VP 和 GEL 管

的管部和杯部

• 其它管仅充满管部(不是杯部)

• ADH, LDC, ODC, H 2 S 和 URE 管 用矿物油覆盖 以形

成厌氧环境

• 盖上培养盒

• 于 36°C ± 2°C 孵育 18-24 小时

判读和解释

试条的判读

• 孵育后 根据使用手册中的读数表判读各反应结果

• 如果 3 个或 3 个以上测定 GLU 试验+或- 为阳性结果

记录所有自发反应于结果报告单上并观察需要附加试剂的

试验的结果

- TDA 试验 加 1 滴 TDA 试剂  深褐色为 阳性反应 记

录于报告单上

- IND 试验 加 1 滴 JAMES 试剂 反应立即发生  粉红

色出现在整个反应应管者为 阳性 记录于报告单上

- VP 试验 加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 试剂 至少等待

10 分钟  浅粉或 红色表明为 阳性结果 记录于报告单

上 如 浅粉红色在 10 至 12 分钟内出现 判断结果为 阴

性

注意 吲哚产生试验必须后进行 因为该反应释放的气

体产物会干扰试条的其他试验 在加入附加试剂后 请小

心勿调换培养盒盖

• 如果加入附加试剂前阳性结果 包括 GLU 试验 的数量

少于 3 个

- 重新培养 24 小时 ± 2小时 且不要加任何试剂

- 重新进行需要加入附加试剂的测试 如前说明

- 为了完成鉴定 可能需要进行补充试验 参考有关鉴定

的段落

解释

鉴定结果从 数字索引中获得

• 所得的反应结果编为数字图谱

所得反应的类型必须以数字化形式记录在报告单 每 3 个

测定为一组 每个以 1 2 和 4 标明 在每组中 阳性反

应以相应的数字相加 由 API 20 NE 的 20 个测定可得一

个 7 位数 氧化酶反应构其第 21 个反应 如阳性则为

4

• 鉴定

使用数据库 (V4.0)进行鉴定

* 根据数字图谱

- 从使用手册的读数表中寻找数字图谱

* 使用鉴定软件

- 在键盘上输入 7 位阿拉伯数字的图谱

在某些情况下 7 位数检索编码还不能区分细菌 必须进行

以下一些补充试验

- 硝酸盐还原到亚硝酸盐(NO2)和氮气(N2) 各加一滴 Nit

1 和 Nit 2 试剂于葡萄糖 GLU 管内 待 2~3 分钟后  红

色表示 阳性结果(NO2) 阴性反应 黄色 可能由于还原

至 N2 有时还有气泡 加 2-3mg 锌粉到葡萄糖 GLU

管 5 分钟后 如果管保持 黄色表示 阳性结果(N2) 记录

于报告单 如果测定变 粉红 这明是 阴性反应 硝酸盐仍

留管内 被锌粉还原 该反应用于检测革兰阴性 氧化酶

阳性的杆菌

注意 出于和吲哚试验同样的原因 参考 试条的判读

中的注意项 硝酸盐还原试验必须后进行

- 动力 (MOB) 接种一安瓿 API M 培养基 参见产物说明

书

- 麦康凯 MacConkey 培养基生长实验(McC) 接种一个

麦康凯 MacConkey 平板 参见产物说明书

- 葡萄糖氧化 (OF-O) 接种一安瓿 API OF 培养基 参见

产物说明书

- 葡萄糖发酵 (OF-F) 接种一安瓿 API OF 培养基 参见

产物说明书

这些在数值编码本开始部分有所介绍的补充试验 可以组

成 9 位数的数值索引 从而可以用鉴定软件获得鉴定结

果

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae

如果分辨率很低 提议进行进一步的试验 请参考鉴定软

件或数值分析索引

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质 量 控 制

培养基 试验条和试剂在有效期内不同阶段需作系统的质量控制 对进行质控实验室 推荐标准菌株 1.  大肠埃希菌

Escherichia coli ATCC ® 25922 或以下菌株之一

2.  嗜麦芽糖寡养单胞菌 Stenotrophomonas maltophilia

ATCC 51331

3.  阴沟肠杆菌 Enterobacter cloacae

ATCC 13047

4.  奇异变形杆菌 Proteus mirabilis

ATCC 35659

5.  肺炎克雷伯菌肺炎亚种 Klebsiella pneumoniae ssp

pneumoniae  ATCC 35657

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.

ONPG ADH LDC ODC CIT H 2 S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO 2 N 2 *

1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + –

2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – –

3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + –

4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + –

5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* ATCC 13047 和 ATCC 25922 菌株可能会观察到 N 2 (+)结果

• ATCC 51331 菌株于胰酶大豆血琼脂上孵育 24-48 小时 可以获得反应图谱

• 其他的菌株于胰酶大豆血琼脂上孵育 18-24 小时 可以获得反应图谱

• 请使用 API NaCl 0.85 % 培养基制备菌悬液

根据当地相应的规定进行质量控制是使用者的责任

方法 的 局限 性

• API 20 E 鉴定系统能准确鉴定在鉴定范围 请查阅该说

明书后的鉴定表 内的肠道细菌和非苛养 革兰氏阴性杆

菌菌种 但不能用于鉴定/排除鉴定范围外的微生物

• 由于在反应原理上 API 技术与传统技术间存在差异 有可

能出现与常规方法不同的生化反应结果 同时由于所用底

物的差异亦造成阳性反应百分比的不同

• 在某些非常罕见的情况下 某些微生物如克雷伯菌属

Klebsiella 或变形菌属 Proteus 与葡萄糖的反应可

能会由阳性转变为阴性 例如可以观察到蓝绿色变化 这

个反应将记录为阴性反应 这种情况已经被反映到鉴定表

中的鉴定百分率上

• 如 果 鉴 定 为 沙 门 菌  Salmonella  或 志 贺 菌

Shigella 请进行血清学鉴定以确认鉴定结果

• 分离自胆囊纤维化病人的非发酵革兰阴性杆菌可能会产生

不典型的生化图谱 影响鉴定的结果

• 必须使用单个微生物的纯培养

预 期 值范围

参阅在本说明书尾部的 反应鉴定表 以取得有关各种生

化反应阳性率的资料

性能

• 肠杆菌

对共 5514 株 本产物鉴定范围内的 不同来源的临床及

收藏菌株鉴定结果显示

- 92.80 % 的菌株可被准确鉴定 需要或不需附加检测

- 4.61 % 的菌株无法鉴定

- 2.59 % 的菌株被错误鉴定

• 其它非苛养革兰阴性杆菌

对共 2386 株 本产物鉴定范围内的 不同来源的临床及

收藏菌株鉴定结果显示

- 90.32 % 的菌株可被准确鉴定 需要或不需附加检测

- 6.16 % 的菌株无法鉴定

- 3.52 % 的菌株被错误鉴定

废 物处理

所有使用或未使用的试剂和其他污染性材料应遵循传染性

或潜在传染性产物的处理程序

每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别进行

废物和污物的处理 同时要严格依照有关的规定对待和处

理所有的废物和污物

担保

生物梅里埃 bioMérieux 拒绝任何形式的担保 明确的或暗

指的 包括任何暗含的商业性和具有特殊用途适用性的担

保 生物梅里埃 bioMérieux 将不对任何偶然的和相因而生

的损害承担义务 生物梅里埃也不会对任何使用者提出的

超过其用于支付购买生物梅里埃产物或服务的偿还要求承

担义务

结 果 判 读 表

结果

试验 有效成分

量

(mg/cup.)

反应/ 酶

阴性 阳性

ONPG

邻硝基苯-半乳糖苷

0.223

β-半乳糖苷酶 无色 黄色(1)

ADH 精氨酸 1.9 精氨酸双水介酶 黄色 红/橙色(2)

LDC 赖氨酸 1.9 赖氨酸脱羧酶 黄色 橙色(2)

ODC 鸟氨酸 1.9 鸟氨酶脱羧 黄色 红/橙色(2)

CIT 柠檬酸钠

0.756

柠檬酸利用 淡绿/黄 兰绿/兰(3)

H2S 硫代硫酸钠 0.075 H2S 产生 无色/微灰 黑色沉淀/细线

URE 脲素 0.76 脲酶 黄色 红/橙色(2)

TDA /立即

TDA 色氨酸

0.38

色氨酸脱氨酶

黄色 深褐

JAMES / 立即

IND 色氨酸

0.19

吲哚产生

无色/浅绿/黄色

粉红

VP 1 + VP 2 / 10 分钟

VP 丙酮酸盐 1.9

3-羟基丁酮产生乙酰甲基甲

醇

无色 粉红/红色 (5)

GEL

Kohn 明胶 0.6 明胶酶 黑色素不扩散 黑色素扩散

GLU

葡萄糖

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

MAN

甘露醇

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

INO

肌醇

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

SOR

山梨醇

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

RHA

鼠李糖

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

SAC

蔗糖

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

MEL

密二糖

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

AMY

苦杏仁苷

0.57 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

ARA

阿拉伯糖

1.9 发酵/氧化(4)

兰/兰绿 黄色

OX (看氧化酶试验说明书) 细胞色素氧化酶 (看氧化酶试验说明书)

(1)  出现浅黄色应判断为阳性结果

(2)  孵育 36-48 小时后 出现橙色应判断为阴性结果

(3)  读小杯顶部的结果 需氧

(4)  发酵始于小管的底部 氧化开始于杯部

(5)  10 分钟后出现的浅粉红色应判断为阴性结果

• 标示的量可能因使用原料的浓度不同而有所调整

• 某些杯含有动物源性产物 特别是蛋白胨

梅里埃20100 肠杆菌鉴定试剂盒API20E

梅里埃20100 肠杆菌鉴定试剂盒API20E